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人外周血淋巴細(xì)胞分離液（FICOLL配制）使用說明1

人外周血淋巴細(xì)胞主要是指體內(nèi)的淋巴細(xì)胞，主要包括T細(xì)胞和B細(xì)胞。外周血淋巴細(xì)胞能夠幫助人體抵御外來的細(xì)菌和病毒，能夠起到良好的免疫作用。人外周血淋巴細(xì)胞分離液（FICOLL配制）是一種用于分離人外周血淋巴細(xì)胞的無菌、低內(nèi)毒素水平的密度梯度分離液。

產(chǎn)品名稱：人外周血淋巴細(xì)胞分離液（FICOLL配制）

產(chǎn)品規(guī)格：200ml

儲(chǔ)存條件：室溫，避光

產(chǎn)品指標(biāo)：

密度            1.077±0.001g/mL

滲透壓        290~350mOsm/kgH2O

無菌           0.1μm 濾膜過濾

原理：根據(jù)血細(xì) 胞的密度差異（紅細(xì)胞和粒細(xì)胞密度為1.090g/mL左右；淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞密度為1.075~1.090g/mL；血小板為 1.030~1.035g/mL），通過離心使一定密度的細(xì)胞按相應(yīng)密度梯度分布，從而將淋巴細(xì)胞從人外周血或臍帶血中分離出來。

實(shí)驗(yàn)步驟（僅供參考）

1. 取新鮮抗凝全血（EDTA、枸櫞酸鈉或肝素抗凝均可）或者去纖維蛋白血液，用等體積的全血及組織稀釋液 或者PBS稀釋全血。

2. 在離心管中加入適量分離液，將稀釋后的血液平鋪到分離液液面上方，注意保持兩液面界面清晰。

3. 室溫，水平轉(zhuǎn)子500~1000g，離心20~30min （血液的體積越大所需的離心力越大，離心 時(shí)間越長，佳的分離條件需摸索，離心轉(zhuǎn) 速大不超過1200g）。

4. 離心后將出現(xiàn)明顯的分層：上層是稀釋的 血漿層，中間是透明的分離液層，血漿與分 離液之間的白膜層即為淋巴細(xì)胞層，離心管 底部是紅細(xì)胞與粒細(xì)胞。

5. 小心的吸取白膜層細(xì)胞到15mL潔凈的離心 管中， 10mL PBS或細(xì)胞洗滌液洗滌白膜層 細(xì)胞。250g，離心10min。

6. 棄上清，5mL的PBS或細(xì)胞清洗液重懸細(xì)胞，250g，離心10min。

7. 重復(fù)上一步驟棄上清，細(xì)胞重懸備用