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南京信帆生物:檢測(cè)宿主細(xì)胞殘留DNA,ddPCR好處多
更新時(shí)間:2016-05-04   點(diǎn)擊次數(shù):1255次

在制造治療性的蛋白、疫苗及其他生物制品時(shí),制藥公司必須從細(xì)菌或哺乳動(dòng)物宿主細(xì)胞中純化出活性的分子。然而,由于這個(gè)過程的效率不高,宿主細(xì)胞的雜質(zhì)(包括DNA)經(jīng)常會(huì)污染產(chǎn)品。因此,制造商必須確保宿主細(xì)胞殘留DNA(HCD)的水平低于WHO的標(biāo)準(zhǔn),通常是100 pg/劑量以下。

這就需要嚴(yán)格的質(zhì)量控制。通常,分析人員采用實(shí)時(shí)定量PCR(qPCR)來測(cè)定殘留DNA的水平,這需要純化出宿主細(xì)胞殘留DNA,以去除樣品中的PCR抑制劑。這一步不僅增加時(shí)間和成本,也會(huì)造成DNA的損失,導(dǎo)致污染水平被低估。

為此,Bio-Rad公司推出了新產(chǎn)品 – ddPCR™ Supermix for Residual DNA Quantification。這種預(yù)混液可配合Bio-Rad的微滴式數(shù)字PCR系統(tǒng)使用,直接測(cè)定生物制品中的宿主細(xì)胞殘留DNA。

與實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)相比,使用微滴式數(shù)字PCR(ddPCR)技術(shù)和預(yù)混液的好處在于可跳過DNA純化的步驟,直接測(cè)定宿主細(xì)胞殘留DNA。Why?因?yàn)槲⒌问綌?shù)字PCR技術(shù)采用反應(yīng)分液和終點(diǎn)分析,不容易受到PCR抑制的影響。

同時(shí),ddPCR技術(shù)對(duì)靶分子的數(shù)量進(jìn)行直接計(jì)數(shù),而不需要建立標(biāo)準(zhǔn)曲線,因此大大簡化了殘留DNA的定量。據(jù)Bio-Rad介紹,每一批的ddPCR Supermix都是在嚴(yán)格的質(zhì)量控制下生物試劑的,確保不含可檢測(cè)的大腸桿菌、小鼠、人、酵母和CHO細(xì)胞DNA。

ddPCR™ Supermix for Residual DNA Quantification是以2x濃度提供的,包含探針法ddPCR所需的各種組分,不含引物、探針和模板。它采用熱啟動(dòng)聚合酶,確保酶在分液的過程中失活。

Bio-Rad的QX200微滴式數(shù)字PCR系統(tǒng)在兩年前推出。與傳統(tǒng)的定量PCR相比,數(shù)字PCR的度和靈敏度更佳。利用微滴式數(shù)字PCR技術(shù),研究人員可以檢測(cè)稀有突變,測(cè)定拷貝數(shù)變異,并對(duì)基因表達(dá)進(jìn)行定量。

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