細(xì)胞鐵離子檢測試劑盒操作步驟
鐵是一種化學(xué)元素，為晶體，它的化學(xué)符號(hào)是Fe ，原子序數(shù)是26，在化學(xué)元素周期表中位于第4周期、第VIII 族，是鐵族元素的代表。是常用的金屬。它是過渡金屬的一種，是地殼含量第二高的金屬元素。
原理：
鐵與蛋白結(jié)合成復(fù)合物，在酸性介質(zhì)中鐵從復(fù)合物中解離出來，再被還原劑還原成二價(jià)鐵， 并與亞鐵嗪生成紫紅色化合物，在 540-580nm 處可比色測定。
適用范圍：該試劑盒可用于培養(yǎng)細(xì)胞中鐵離子定量檢測。
操作步驟：
1. 樣品準(zhǔn)備（以 24 孔板為例）：
將含鐵元素 DMEM 培養(yǎng)過的細(xì)胞用冷的 PBS 2ml 洗兩遍，將 PBS 吸棄（若不馬上檢測可將 其凍存于-20℃）。200ul/孔裂解液裂解細(xì)胞，置于搖床裂解 2h。
2. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：用試劑盒提供的稀釋用液將 3mM 的標(biāo)準(zhǔn)品母液稀釋為：300 uM、150uM、
75uM、37.5uM、18.75uM、9.38uM、4.69uM。注意倍比稀釋并設(shè)置 0 濃度對(duì)照反應(yīng)管。
3. 將緩沖液與 4.5%KON溶液按 1:1 混勻，稱為混液 A。
4. 參考下表使用 1.5ml 離心管，設(shè)置空白對(duì)照管、標(biāo)準(zhǔn)品管和樣品管。如果樣品中的鐵元 素含量過高，用裂解液適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測定。
5. 混勻，60℃ 孵育 1h。
6. 冷卻至室溫，將管蓋與管壁上的液滴離心入管底。
7. 加入 30ul 鐵離子檢測劑，混勻，室溫孵育，30min。
8. 取 200ul 于 96 孔板，在 550nm 測定吸光度。如果不能測定 550nm，也可以在 540nm~580nm 范圍內(nèi)檢測。
9. 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并計(jì)算鐵離子濃度。
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